In einer Nacht im Jahr 1964 versammeln sich vier Ikonen des Sports, der Musik und des Aktivismus, um eine der größten Überraschungen der Boxgeschichte zu feiern. Der Außenseiter Cassius Clay, der sich später Muhammad Ali nennt, besiegt den Schwergewichts-Champion Sonny Liston in der Miami Convention Hall. Clay gedenkt dem Ereignis mit seinen drei Freunden Malcolm X, Sam Cooke und Jim Brown.

Basierend auf dem preisgekrönten gleichnamigen Theaterstück ist One Night in Miami eine fiktive Geschichte, inspiriert von der historischen Nacht, die diese vier beeindruckenden Persönlichkeiten zusammen verbracht haben. Der Film unter der Regie von Regina King beleuchtet die Kämpfe, die diese Männer austragen mussten, und ihre entscheidende Rolle in der Bürgerrechtsbewegung und dem kulturellen Umbruch der 1960er Jahre. Mehr als 40 Jahre später klingen ihre Gespräche über Rassenungerechtigkeit, Religion und persönliche Verantwortung immer noch nach.